瓊脂糖偶聯(lián)甘露糖的凝膠的制備
2025-11-12
[22]
瓊脂糖偶聯(lián)甘露糖的凝膠制備主要涉及瓊脂糖與甘露糖的混合及凝膠化過程，以下是詳細的制備步驟及注意事項：
一、材料準備
瓊脂糖：選擇合適的瓊脂糖濃度，根據(jù)目標分子大小調(diào)整。例如，分離1kb以下DNA推薦使用1.5%濃度，大片段（>5kb）則用0.5%濃度。
甘露糖：作為配體，與瓊脂糖混合以改善凝膠性能。
緩沖液：常用TAE（Tris-Acetate-EDTA）或TBE（Tris-Borate-EDTA），需與制膠緩沖液一致。
其他材料：制膠模具（含梳子）、電泳槽、染料（如溴化乙錠EB或更安全的RedView/GelGreen）等。
二、制備過程
緩沖液配制：
根據(jù)需要配制適當濃度的緩沖液，如將5×TBE緩沖液稀釋至0.5×TBE。
膠液制備：
稱取適量瓊脂糖，置于錐形瓶中。
加入配制好的緩沖液，放入微波爐或電爐上加熱至瓊脂糖全部熔化。加熱過程中要不時搖動，使附于瓶壁上的瓊脂糖顆粒進入溶液。加熱時應蓋上封口膜，以減少水份蒸發(fā)。
膠板制備：
將有機玻璃膠槽兩端分別用橡皮膏緊密封住，置于水平支持物上。
插上樣品梳子，注意梳子齒下緣應與膠槽底面保持1mm左右的間隙。
向冷卻至50-60℃的瓊脂糖膠液中加入染料（如EB），使其終濃度為0.5μg/ml（也可電泳后再染色）。
用移液器吸取少量融化的瓊脂糖凝膠封橡皮膏內(nèi)側(cè)，待瓊脂糖溶液凝固后將剩余的瓊脂糖小心地倒入膠槽內(nèi)，使膠液形成均勻的膠層。倒膠時的溫度不可太低，否則凝固不均勻；速度也不可太快，否則容易出現(xiàn)氣泡。
凝膠凝固：
待膠凝固后撥出梳子，注意不要損傷梳底部的凝膠。
向槽內(nèi)加入緩沖液至液面恰好沒過膠板上表面。
甘露糖偶聯(lián)（此步驟可能因具體實驗需求而異，以下是一種可能的偶聯(lián)方式）：
在凝膠制備過程中或制備后，通過化學方法將甘露糖偶聯(lián)到瓊脂糖凝膠上。這通常涉及使用偶聯(lián)劑（如碳二亞胺）將甘露糖的羧基與瓊脂糖的氨基或羥基連接起來。
偶聯(lián)條件（如溫度、pH值、反應時間）需根據(jù)具體實驗需求進行優(yōu)化。
三、注意事項
溫度控制：瓊脂糖溶液溫度過高（>65℃）會導致孔徑不均，過低則凝固緩慢。倒膠前建議膠液冷卻至50-60℃。
氣泡排除：倒膠前用移液槍吸出氣泡，或加入少量異丙醇輔助消泡。灌膠后盡量排除梳孔之間或底部的氣泡。
凝膠厚度：凝膠厚度建議3-5mm，以獲得良好的分離效果。
染料選擇：EB具有致癌性，操作時需戴手套、護目鏡，染色后避免長時間暴露?？蛇x擇無毒害性的核酸染料（如RedView）。
儲存條件：未用完的凝膠可浸泡于電泳緩沖液中，4℃保存不超過2周。
關于我們:
陜西星貝愛科生物科技經(jīng)營的產(chǎn)品種類包括有：合成磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、嵌段共聚物、磁性納米顆粒、納米金及納米金棒、近紅外熒光染料、活性熒光染料、熒光標記物、蛋白交聯(lián)劑、小分子PEG衍生物、點擊化學產(chǎn)品、樹枝狀聚合物、環(huán)糊精衍生物、大環(huán)配體類、熒光量子點、透明質(zhì)酸衍生物、石墨烯或氧化石墨烯、碳納米管、富勒烯，二氧化硅及介孔二氧化硅，聚合物微球，近紅外熒光染料，聚苯乙烯微球，上轉(zhuǎn)換納米發(fā)光顆粒，MRI核磁造影產(chǎn)品，熒光蛋白及熒光探針等等。
溫馨提示：僅用于科研，不能用于人體！
相關產(chǎn)品：
谷氨酰胺偶聯(lián)瓊脂糖珠
18462-64-1
DOTMA
75796-37-1
外泌體綠色熒光標記染料PKH67
四羧基酞菁鋅
四羧基酞菁
cas67595-99-7，四氨基苯基卟啉鎳
cas67595-97-5，四氨基苯基卟啉銅
cas67201-98-3，四氨基苯基卟啉鈷
